Identificação de patógenos endodônticos por PCR e quantificação de DNA em amostras extraídas de dentes com periodontite apical pós-tratamento

Autores

  • Marcos Sergio Endo Discipline of Endodontics, Department of Restorative Dentistry, Piracicaba Dental School, State University of Campinas, Piracicaba, SP
  • Fernanda Graziela Corrêa Signoretti Discipline of Endodontics, Department of Restorative Dentistry, Piracicaba Dental School, State University of Campinas, Piracicaba, SP
  • Ariane Cássia Salustiano Marinho Discipline of Endodontics, Department of Restorative Dentistry, Piracicaba Dental School, State University of Campinas, Piracicaba, SP
  • Frederico Canato Martinho Discipline of Endodontics, Department of Restorative Dentistry, São José dos Campos Dental School, State University of São Paulo, SP
  • Brenda Paula Figueiredo de Almeida Gomes Discipline of Endodontics, Department of Restorative Dentistry, Piracicaba Dental School, State University of Campinas, Piracicaba, SP

DOI:

https://doi.org/10.11606/issn.2357-8041.clrd.2014.82484

Palavras-chave:

Endodontia, Falha de Tratamento, Periodontite Periapical, Bactérias, Reação em Cadeia da Polimerase, DNA, Clorexidina.

Resumo

Objetivo: O objetivo deste estudo clínico foi quantificar a concentração de DNA e detectar algumas espécies bacterianas de amostras de dentes tratados endodonticamente com periodontite apical após a remoção da guta-percha (S1), após o preparo químico-mecânico na primeira sessão (S2), 5 dias após o preenchimento do canal com solução fisiológica estéril (S3), após reinstrumentação na segunda sessão (S4), e 14 dias após a inserção da medicação intracanal na terceira sessão (S5). Métodos: Quinze dentes tratados endodonticamente foram selecionados. A remoção da guta-percha foi realizada por meio da técnica coroa-ápice. Utilizaram-se limas manuais associadas à clorexidina gel a 2% durante o preparo químico-mecânico. A medicação intracanal selecionada foi à base de hidróxido de cálcio. DNA foi isolado das amostras e foram investigadas 14 espécies bacterianas (primer espécie-específi co16S rDNA). A concentração de DNA foi quantifi cada utilizando o espectrofotômetro NanoDropTM 2000. Resultados: Em todos os casos foram detectadas bactérias, como revelado por meio do primer universal. DNA foi isolado de todas as amostras, com uma concentração média de 4,24 ± 2,9 ng/µL (S1), 3,39 ± 1,54 ng/ µL (S2), 4,0 ± 1,94 ng/µL (S3), 2,66 ± 0,98 ng/µL (S4) e 3,97 ± 2,32 ng/µL (S5). Parvimonas micra e Enterococcus faecalis (S1), P. micra (S2), Porphyromonas endodontalis e E. faecalis (S3), E. faecalis e Prevotella nigrescens (S4/S5) foram as espécies mais frequentemente detectadas. A concentração de DNA diminuiu entre S3 e S4 (p = 0,0256), ao passo que um aumento foi observado entre S4 e S5. Conclusão: Uma ampla variedade de espécies bacterianas foi detectada em canais radiculares de dentes tratados endodonticamente com periodontite apical. Além disso, o uso da medicação intracanal não potencializou a redução da concentração de DNA bacteriano.

Downloads

Os dados de download ainda não estão disponíveis.

Referências

Siqueira JF Jr. Aetiology of root canal treatment failure: why well-treated teeth can fail. Int Endod J 2001; 34(1): 1-10.

Nair R, Sjögren U, Figdor D, et al. Persistent periapical radiolucencies of root-filled human teeth, failed endodontic treatments, and periapical scars. Oral Surg Oral Med Oral Pathol Oral Radiol Endod 1999; 87(5): 617–627.

Sjögren U, Figdor D, Persson S, et al. Influence of infection at the time of root filling on the outcome of endodontic treatment of teeth with apical periodontitis. Int Endod J 1997; 30(5): 297–306.

Rolph HJ, Lennon A, Riggio MP, et al. Molecular identification of microorganisms from endodontic infections. J Clin Microbiol 2001; 39(9): 3282–3289.

Bystrom A, Sundqvist G. The antibacterial action of sodium hypochlorite and EDTA in 60 cases of endodontic therapy. Int Endod J 1985; 18(1): 35–40.

Shuping GB, Orstavik D, Sigurdsson A, et al. Reduction of intracanal bacteria using nickel-titanium rotary instrumentation and various medications. J Endod 2000; 26(12): 751–755.

Sjögren U, Figdor D, Spangberg L, et al. The antimicrobial effect of calcium hydroxide as a short-term intracanal dressing. Int Endod J 1991; 24(3): 119–125.

Siqueira JF Jr, Rôças IN. Polymerase chain reaction-based analysis of microorganisms associated with failed endodontic treatment. Oral Surg Oral Med Oral Pathol Oral Radiol Endod 2004; 97(1): 85–94.

Rôças IN, Siqueira JF Jr, Aboim MC, et al. Denaturing gradient gel electrophoresis analysis of bacterial communities associated with failed endodontic treatment. Oral Surg Oral Med Oral Pathol Oral Radiol Endod 2004; 98(6): 741–749.

Peters LB, van Winkelhoff AJ, Buijs JF, et al. Effects of instrumentation, irrigation and dressing with calcium hydroxide on infection in pulpless teeth with periapical bone lesions. Int Endod J 2002; 35(1): 13–21.

Möller AJ. Microbiological examination of root canals and periapical tissues of human teeth. Methodological studies. Odontol Tidskr 1966; 74(5):1–380.

Martinho FC, Chiesa WMM, Leite FRM, et al. Antigenic activity of bacterial endodontic contents from primary root canal infection with periapical lesions against macrophage in the release of interleukin-1beta and tumor necrosis factor alpha. J Endod 2010; 36(9): 1467-1474.

Figdor D, Davies JK, Sundqvist G. Starvation survival, growth and recovery of Enterococcus faecalis in human serum. Oral Microbiol Immunol 2003; 18(4): 234 –9.

Haque KA, Pfeiffer RM, Beerman MB, et al. Performance of high-throughput DNA quantification methods. BMC Biotechnol 2003; 3:20.

Pinheiro ET, Gomes BP, Ferraz CC, et al. Microorganisms from canals of root-filled teeth with periapical lesions. Int Endod J 2003; 36(1): 1–11.

Siqueira JF Jr, Rocas IN. PCR methodology as a valuable tool for identification of endodontic pathogens. J Dent 2003; 31(5): 333–339.

Sakamoto M, Siqueira JF Jr, Rôças IN, et al. Bacterial reduction and persistence after endodontic treatment procedures. Oral Microbiol Immunol 2007; 22(1):19-23.

Schmidt T, Relman DA. Phylogenetic identification of uncultured pathogens using ribosomal RNA sequences. Methods Enzymol 1994; 235: 205-222.

Molander A, Reit C, Dahlén G, et al. Microbiological status of root-filled teeth with apical periodontitis. Int Endod J 1998; 31(1): 1–7.

Sundqvist G, Figdor D, Persson S, et al. Microbiologic analysis of teeth with failed endodontic treatment and the outcome of conservative re-treatment. Oral Surg Oral Med Oral Pathol Oral Radiol Endod 1998; 85(1): 86–93.

Siqueira JF Jr, Rôças IN. Exploiting molecular methods to explore endodontic infections: Part 1—current molecular technologies for microbiological diagnosis. J Endod 2005; 31(6): 411–423.

Vianna ME, Horz HP, Conrads G, et al. Comparative analysis of endodontic pathogens using checkerboard hybridization in relation to culture. Oral Microbiol Immunol 2008; 23(4): 282-290.

Siqueira JF Jr, Lopes HP. Mechanisms of antimicrobial activity of calcium hydroxide: a critical review. Int Endod J 1999; 32(5): 361–369.

Gomes BP, Pinheiro ET, Jacinto RC, et al. Microbial analysis of canals of root-filled teeth with periapical lesions using polymerase chain reaction. J Endod 2008; 34(5): 537-540.

Blome B, Braun A, Sobarzo V, et al. Molecular identification and quantification of bacteria from endodontic infections using real-time polymerase chain reaction. Oral Microbiol Immunol 2008; 23(5):384-390.

Ter Steeg PF, van der Hoeven JS. Development of periodontal microflora on human serum. Microbial Ecol Health Dis 1989; 2: 1–10.

Rôças IN, Siqueira JF Jr, Santos KR, et al. ‘‘Red complex’’ (Bacteroides forsythus, Porphyromonas gingivalis, and Treponema denticola) in endodontic infections: a molecular approach. Oral Surg Oral Med Oral Pathol Oral Radiol Endod 2001; 91(4): 468–471.

Podbielski A, Spahr A, Haller B. Additive antimicrobial activity of calcium hydroxide and chlorhexidine on common endodontic bacterial pathogens. J Endod 2003; 29(5): 340–345.

Foschi F, Nucci C, Montebugnoli L, et al. SEM evaluation of canal wall dentine following use of Mtwo and ProTaper NiTi rotary instruments. Int Endod J 2004: 37(12): 832–839.

Peciuliene V, Balciuniene I, Eriksen HM, et al. Isolation of Enterococcus faecalis in previously root-filled canals in a Lithuanian population. J Endod 2000; 26(10): 593–595.

Williams JM, Trope M, Caplan DJ, et al. Detection and quantitation of E. faecalis by real-time PCR (qPCR), reverse transcription-PCR (RT-PCR), and cultivation during endodontic treatment. J Endod 2006; 32(8): 715–721.

Rôças IN, Siqueira JF Jr. In vivo antimicrobial effects of endodontic treatment procedures as assessed by molecular microbiologic techniques. J Endod 2011; 37(3): 304-10.

Siqueira JF Jr, de Uzeda M, Fonseca ME. A scanning electron microscopic evaluation of in vitro dentinal tubules penetration by selected anaerobic bacteria. J Endod 1996; 22(6): 308-310.

Love MR. Enterococcus faecalis – a mechanism for its role in endodontic failure. Int Endod J 2001; 34(5): 399–405.

Siqueira JF Jr, de Uzeda M. Disinfection by calcium hydroxide pastes of dentinal tubules infected with two obligate and one facultative anaerobic bacteria. J Endod 1996; 22(12): 674-676.

Downloads

Publicado

2014-12-31

Edição

v. 20 n. 4 (2014)

Seção

Artigos originais

Licença

Solicita-se aos autores enviar, junto com a carta aos Editores, um termo de responsabilidade. Dessa forma, os trabalhos submetidos à apreciação para publicação deverão ser acompanhados de documento de transferência de direitos autorais, contendo a assinatura de cada um dos autores, cujo modelo está a seguir apresentado:

Eu/Nós, _________________________, autor(es) do trabalho intitulado _______________, submetido agora à apreciação da Clinical and Laboratorial Research in Dentistry, concordo(amos) que os autores retém o direitos autorais e garantem a revista o direito da primeira publicação, sendo o trabalho simultaneamente autorizado sob a Creative Commons Attribution License, que permite a outros compartilhar o artigo com reconhecimento da autoria do trabalho e publicação inicial nesta Revista. Aos autores será possibilitada a distribuição em separado da versão publicada do artigo, arranjos contratuais adicionais para a distribuição não-exclusiva da versão publicada (por exemplo, publicá-la em um repositório institucional ou publicação em livro), com o reconhecimento de sua publicação inicial nesta revista.  Aos autores será permitido e encorajado publicar seu trabalho on-line (por exemplo, em repositórios institucionais ou em seu site) antes e durante o processo de envio, pois pode levar a intercâmbios produtivos, bem como a maior citação do trabalho publicado. (Veja The Effect of Open Access).

Data: ____/____/____Assinatura(s): _______________